Вирус Бешенства. Уличный и фиксированный вирусы бешенства

21.06.2020

Возбудитель болезни - РНК-содержащий вирус, относящийся к роду Lissavirus семейства Rabdoviridae. Как и другие рабдовирусы, он имеет пулевидную форму. Длина вирионов - 180 нм, диаметр - 75 - 80 нм. Вирус удается культивировать в развивающихся куриных и утиных эмбрионах, в культурах некоторых клеток. Штаммы возбудителя бешенства, циркулирующие в природе (уличный вирус), патогенны для всех теплокровных животных. В наиболее высоких титрах вирус накапливается в центральной нервной системе зараженных животных, особенно в аммониевых рогах и коре больших полушарий головного мозга, в мозжечке и продолговатом мозге. Высокий титр возбудителя бешенства и в слюнных и слезных железах. Различают «дикий» (уличный) и «фиксированный» вирусы бешенства. Уличный вирус бешенства циркулирует в естественных условиях и характеризуется высокой патогенностью для людей и животных, образует в мозговых клетках специфические тельца Бабеша - Негри. «Фиксированный» вирус был получен Л. Пастером путем многоразового интрацеребрального пассажа вируса уличного бешенства через организм кролей, вследствие чего вирус потерял свою вирулентность для человека и животных, а также способность образовывать в мозге тельца Бабеша - Негри. Фиксированный вирус используется как исходный материал для изготовления антирабических вакцин. Все 7 серотипов полевых штаммов вируса бешенства, которые были изолированы от людей, животных и грызунов в Центральной Европе, от летающих мышей в Нигерии, от африканских землероек, а также от комаров и москитов в Нигерии и Судане, от коней в Нигерии, имеют широкую антигенную вариабельность и родственные связи в иммунобиологическом отношении, а прививка животных антирабической вакциной из пастеровского штамма создает иммунитет против вируса бешенства, выделенного в разных частях мира.

Реакции преципитации (РП ) предложены Краусом (1897) и основаны на феномене образования видимого осадка (преципитата) или общего помутнения среды после взаимодействия растворимых либо находящихся в коллоидном дисперсном состоянии Аг с AT. РП ставят в специальных узких пробирках. В качестве реагентов используют гипериммунные преципитирующие сыворотки с высокими титрами AT к гомологичным Аг. При постановке РП разводят не сыворотку, а Аг. Реакционная среда должна содержать электролиты (физиологический раствор) и иметь нейтральный рН. РП позволяет быстро (в течение нескольких секунд) выявлять незначительные количества Аг. Они очень чувствительны, и их применяют для тонкого иммунохимического анализа, выявляющего отдельные компоненты в смеси Аг. Метод имеет несколько разновидностей (рис. 10-16). Реакция кольцепреципитации: На слой антисыворотки наслаивают жидкость, содержащую растворимый Аг, и через несколько секунд наблюдают образование кольца преципитата. Цели: индикация, идентефикация, титрование антиген или антитела. Сущность: АГ и АТ движутся на встречу друг к другу и при специфичности в месте соединяются в комплекс АГ+АТ в виде светлой полосы.

Сем. Тогавирусов (вирусная диарея крупного рогатого скота)

(Togaviridae), семейство вирусов, состоящее из родов Alphavirus, Flavivirus, Rubivirus и Pestivirus. Вирусы содержат однонитчатую РНК с мол. м. 3-4 X 106 дальтон, линейной формы, к-рая является инфекционной. Вирионы диам. 50-70 нм (альфавирусы), 40-50 нм (флявивирусы), 70 нм (рубивирусы), 40 нм (пестивирусы). Для капсида альфавирусов свойствен икосаэдральный тип симметрии. Сборка вирионов происходит в цитоплазме клеток на мембранных структурах. У флявивирусов в составе вириона имеются 3 структурных белка, у альфавирусов 2-3. При репликации в клетках вирусы обоих родов индуцируют образование РНК-зависимой РНК-полимеразы. Вирусы чувствительны к действию жирорастворителей. Этиология. Возбудитель болезни - сферич. РНК-содержащий вирус рода Pestivirus сем. Togaviridae. Величина вирусных частиц 30-40 нм. Вирус может годами сохраняться при t ниже 20°С, в культуральной жидкости не теряет биол. активность до 1 года, в крови, лимфатич. узлах, селезёнке и др. патол. материале - до 6 мес. При t 25 °С в течение 1 сут вирус практически не снижает биол. активности, при t 37 °С погибает через 5 сут. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, трипсину и дезоксихолату натрия. Эпизоотология. В естеств. условиях В. д. к. р. с. болеют кр. рог. скот, буйволы, олени и косули. Наиболее восприимчивы животные в возрасте от 6 мес до 2 лет. Источник возбудителя инфекции - больные животные.

48.Сплит-вакцины, методы получения .

Сплит-вакцины или расщеплённые (Ваксигрип, Бегривак, Флюарикс) содержат разрушенные инактивированные вирионы вируса гриппа - в её состав входят все вирионные белки вируса, не только поверхностные, но и внутренние антигены. За счёт высокой очистки в ней отсутствуют вирусные липиды и белки куриного эмбриона. Сплит-вакцины или расщеплённые (Ваксигрип, Бегривак, Флюарикс) содержат разрушенные инактивированные вирионы вируса гриппа - в её состав входят все вирионные белки вируса, не только поверхностные, но и внутренние антигены. За счёт высокой очистки в ней отсутствуют вирусные липиды и белки куриного эмбриона. Преимущество сплит-вакцин в том, что они содержат как наружные, так и внутренние антигены вируса гриппа, при этом они избавлены от самого главного недостатка цельновирионных вакцин – наличия токсинов. Сплит-вакцины можно применять с 6-месячного возраста, они рекомендованы для предотвращения гриппа у беременных женщин. Наличие открытых для иммунной системы внутренних антигенов вируса гриппа (нуклеокапсида и матриксного белка) делает сплит-вакцины уникальными. Они защищают не только от ежегодных мутаций вируса гриппа, но частично и от всех возможных разновидностей вируса, поскольку внутренние антигены подвержены лишь незначительным мутациям. По сути дела, сплит-вакцины представляют собой «золотую середину» в профилактике гриппа, поскольку по уровню побочных реакций аналогичны субъединичным вакцинам, а по иммунологической эффективности – цельновирионным. Профилактическая эффективность вакцин этого класса колеблется в интервале от 75 до 96%. Классическим примером препаратов этого класса является французская вакцина Ваксигрип, компании Санофи Пастер (подразделения СанофиАвентис), которая присутствует на рынке Европы уже более 60 лет. Вслед за этой вакциной, другие производители также наладили выпуск сплит-вакцин. В России на сегодняшний день, сплит-вакцины не выпускаются отечественными производителями, а лишь переупаковываются из импортируемого сырья (Бегривак). В 2009 году китайский производитель зарегистрировал свою вакцину Флюваксин.

МУ 3.3.1.1099-02

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

3.3.1. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА

Безопасность работы с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства

Дата введения 2002-04-01

1. РАЗРАБОТАНЫ Российским научно-исследовательским институтом "Микроб" Министерства здравоохранения Pocсийской Федерации (д.м.н. И.А.Дятловым, к.м.н. А.К.Никифоровым, к.м.н. С.А.Ереминым); Государственным НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича Министерства здравоохранения Российской Федерации (д.м.н. А.А.Мовсесянцем, к.м.н. И.А.Озерецковским, н.с. Г.Б.Агеенко).

3. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 15 января 2002 года. Введены в действие 1 апреля 2002 года.

4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

1.1. Настоящие методические указания разработаны в соответствии с Федеральным законом "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ , "Положением о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании" и санитарными правилами "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами. СП 1.2.731-99" .

1.2. Требования настоящих методических указаний обязательны для органов и учреждений здравоохранения субъектов Российской Федерации.

2. Нормативные ссылки

В настоящих методических указаниях использованы ссылки на следующие нормативные документы:

2.1. Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" N 52-ФЗ от 30 марта 1999 г .

2.2. Санитарные правила "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами. СП 1.2.731-99" .

2.3. Санитарные правила "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. СП 1.2.036-95" .

2.5. Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев), утв. Минздравом СССР от 6 апреля 1973 N 1045-73.

2.6. Строительные нормы и правила "Общественные здания и сооружения". СНиП 2.08.02-89 и "Пособие по проектированию учреждений здравоохранения" в 5 томах. - Т.1, 3, 5. Госгражданстрой. - М., 1989.

2.7. ОСТ-42-21-2-85 "Стерилизация и дезинфекция изделий медицинского назначения. Методы, средства. Режимы".

2.8. Приказ "Об утверждении временных перечней вредных, опасных веществ и производственных факторов, а также работ, при выполнении которых проводятся предварительные и периодические медицинские осмотры", утв. Минздравмедпромом и Госкомсанэпиднадзором России от 05.10.95 N 280/88 .

2.9. "Инструкция по эксплуатации и контролю эффективности вентиляционных устройств на объектах здравоохранения", утв. Минздравом СССР от 20 марта 1975 г.

2.11. "Методические указания по применению бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях", утв. Минздравмедпромом России oт 28.02.95 N 11-16/03-06 .

2.12. "Методические указания по контролю работы паровых и воздушных стерилизаторов" , утв. Минздравом СССР от 28 февраля 1991 г. N 15/6-5 .

2.13. "Правила техники безопасности, производственной санитарии и санитарно-противоэпидемического режима для предприятий по производству бактерийных и вирусных препаратов", утв. Минздравом СССР от 30 августа 1979 г.

2.14. Методы лабораторных исследований по бешенству. ВОЗ. - Женева,1975.

3. Термины, определения и сокращения

Авария - нештатная ситуация, при которой создается реальная или потенциальная возможность выделения патогенного агента в воздух производственной зоны, окружающую среду или заражение персонала.

Биологическая безопасность - система медико-биологических, организационных и инженерно-технических мероприятий и средств, направленных на защиту работающего персонала, населения и окружающей среды от воздействия патогенных биологических агентов.

Бокс биологической безопасности - конструкция, используемая для физической изоляции (удержания и контролируемого удаления из рабочей зоны) микроорганизмов с целью предотвращения возможности заражения персонала и контаминации воздуха рабочей зоны и окружающей среды.

Боксированное помещение (бокс) - изолированное помещение с тамбуром (предбоксником).

Лаборатория - структурное подразделение, выполняющее экспериментальные и /или/ производственные работы с патогенными биологическими агентами.

"Заразная" зона - помещение или группа помещений лаборатории, где осуществляются манипуляции с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства.

"Чистая" зона - помещение или группа помещений лаборатории, где не проводятся манипуляции с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства.

Производственная работа - работа по производству медицинских иммунобиологических препаратов с использованием производственных штаммов фиксированного вируса бешенства.

Фиксированный вирус бешенства* - аттенуированный штамм вируса бешенства, полученный путем длительного пассирования через головной мозг кролика. Производственные штаммы фиксированного вируса бешенства хранятся в ГИСК им. Л.А.Тарасевича и выдаются один раз в год учреждениям, имеющим право на работу с микроорганизмами III-IV группы патогенности.
_______________
* Например, штаммы фиксированного вируса бешенства "Москва" и "CVS".

СИЗ - средства индивидуальной защиты.

4. Требования к организации работы с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства

4.1. Общие требования

Работа с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства может проводиться в лабораториях, имеющих разрешение, выданное в установленном порядке Главным государственным санитарным врачом субъекта Российской Федерации сроком на 5 лет. Оно утрачивает силу при передислокации или перепланировке лаборатории, а также может быть аннулировано при нарушениях требований биологической безопасности.

4.2. Требования к производственным штаммам фиксированного вируса бешенства

Комитет экспертов ВОЗ (1972) рекомендовал следующие требования к производственным штаммам фиксированного вируса бешенства:

- тщательная регистрация истории пассажей;

- проведение в производстве не более 10 пассажей с момента последнего контроля его биологических свойств;

- минимальная патогенная активность для лабораторных животных при экстраневральном введении;

- антигенная специфичность и иммуногенная активность;

- изучение свойств производственного штамма фиксированного вируса бешенства после каждых 10 пассажей.

Фиксированный вирус бешенства должен иметь следующие основные признаки:

- короткий инкубационный период (4-5 дней);

- большую патогенность для кроликов при интрацеребральном заражении;

- значительное ослабление способности образовывать тельца Негри;

- вызывать паралитическую форму бешенства без явлений возбуждения;

- накопление в ЦНС мышей до 6,0-7,0 IgLD/0,03 мл;

- высокую тропность к ЦНС и низкую тропность к внутренним органам.

4.3. Требования к помещениям и оборудованию лаборатории

4.3.1. Лаборатории, работающие с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства должны располагаться в отдельно стоящем здании или изолированной части здания с отдельным входом.

4.3.2. Лаборатория должна быть обеспечена водопроводом, канализацией, электричеством, отоплением и вентиляцией. Все помещения лаборатории должны иметь естественное и искусственное освещение в зависимости от вида работ в соответствии с требованиями действующих нормативных документов.

4.3.3. Помещения лаборатории должны быть разделены на "заразную" и "чистую" зоны. Планировочные решения и размещение оборудования должны обеспечивать поточность продвижения производственных штаммов фиксированного вируса бешенства и выполнение требований настоящей инструкции.

4.3.4. Лаборатория должна иметь набор рабочих комнат и других помещений, включая душевую комнату, в соответствии с производственной мощностью и номенклатурой выполняемых технологических операций.

4.3.5. Внутренняя отделка помещений должна быть выполнена в соответствии с функциональным назначением. Поверхность пола, стен, потолка в лабораторных помещениях "заразной" зоны должна быть гладкой, без щелей, легко обрабатываемой, устойчивой к действию моющих и дезинфицирующих средств, полы не должны быть скользкими.

4.3.6. Окна и двери помещений "заразной" зоны лаборатории должны быть герметичными.

4.3.7. Имеющаяся вытяжная вентиляция из "заразной" зоны лаборатории должна быть изолирована от других вентиляционных систем и оборудована фильтрами тонкой очистки воздуха. При использовании боксов биологической безопасности II класса, снабженных системой вытяжной вентиляции с фильтрами тонкой очистки типа "Лайк", система вытяжной вентиляции может быть использована без установки фильтров.

4.3.8. Разрешается установка кондиционеров в рабочих комнатах и боксах. Во время работы с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства кондиционеры должны быть отключены.

4.3.9. Лабораторная мебель в "заразной" зоне должна иметь покрытие, устойчивое к действию моющих и дезинфицирующих средств. Поверхность столов не должна иметь швов и трещин.

4.3.10. Ширина проходов к рабочим местам или между двумя рядами выступающего оборудования должна быть не менее 1,5 м (с учетом выступающих конструкций).

4.3.11. Помещения, где проводится работа с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства, должны быть оборудованы бактерицидными лампами в соответствии с "Методическими указаниями по применению бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях". Лампы включают после проведения влажной уборки. Вход в помещение разрешается только после проветривания не менее 30 мин (при применении безозоновых бактерицидных ламп проветривания не требуется). Необходимо вести учет времени работы каждой лампы с отметкой в журнале.

4.3.12. При ориентации окон на юг необходимо предусмотреть защиту рабочих столов от попадания прямого солнечного света путем использования светозащитных пленок, жалюзи из материала, устойчивого к дезинфектантам.

4.3.13. Помещения лабораторий должны быть непроницаемы для грызунов и насекомых.

4.3.14. Лаборатория должна быть обеспечена средствами пожаротушения.

4.4. Требования к проведению работ в лаборатории

4.4.1. Работу с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства выполняют специалисты с высшим и средним специальным образованием, прошедшие специальную подготовку.

4.4.2. Персонал допускается к работе с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства после проведения инструктажа по соблюдению требований биологической безопасности. Последующие инструктажи проводят не реже 1 раза в год, с записями в соответствующих журналах.

4.4.3. Приборы, оборудование и средства измерений, используемые в работе лаборатории, должны быть аттестованы, технически исправны, подвергаться метрологическому контролю в установленные сроки, иметь технический паспорт. На каждый прибор (установку) должны быть разработаны правила (инструкция) по их эксплуатации с учетом требований биологической безопасности.

4.4.4. В лаборатории должны использоваться дезинфицирующие средства, допущенные к применению (3%-ный хлорамин). Срок хранения готового раствора не должен превышать 15 суток.

4.4.5. В помещениях "заразной" зоны лаборатории проводятся:

- работа с животными (заражение, вскрытие);

- содержание инфицированных животных;

- дезинтеграция, гомогенизация мозговых тканей и другие операции с вероятным образованием аэрозоля;

- заражение культуры клеток;

- приготовление взвесей и суспензий;

- работа с лиофилизированными производственными штаммами фиксированного вируса бешенства.

4.4.6. Во время работы двери рабочих комнат должны быть закрыты. Перед работой включается вентиляция "на отток". Выход из рабочей комнаты во время проведения работы запрещается.

4.4.7. Заражение животных осуществляется не менее чем двумя сотрудниками.

4.4.8. При пипетировании необходимо пользоваться резиновыми грушами или автоматическими устройствами.

4.4.9. Перед использованием посуда, пипетки, оборудование, шприцы и т.д. должны быть проверены на целостность и исправность.

4.4.10. Ампулы с лиофилизированными производственными штаммами фиксированного вируса бешенства вскрывают стерильно над подносом или лотком с марлевой салфеткой, пропитанной дезинфицирующим раствором. Верхний конец ампулы нагревают над пламенем горелки, снимают парафин, затем кусочком стерильной ваты, смоченным в стерильной воде, осторожно прикасаются к оттянутому концу ампулы для образования трещины. Той же влажной ватой обводят вокруг носика ампулы. После образования круговой (или не полностью круговой) трещины конец ампулы накрывают марлевой салфеткой или ватой и обламывают пинцетом.

4.4.11. После вскрытия ампулы в нее добавляют 1,0 мл стерильной дистиллированной воды и осторожно встряхивают. Полученную суспензию, содержащую фиксированный вирус бешенства используют для заражения лабораторных животных.

4.4.12. Для внутримозгового заражения кролика его надежно фиксируют на специальном станке или дают легкий наркоз (2-2,5 мл раствора Рометара внутримышечно за 20-30 мин до заражения). Затем аккуратно выстригают шерсть в зоне предполагаемого введения, обрабатывают 70%-ным раствором этанола и 5%-ным раствором йода и с помощью стерильного шприца емкостью 2 мл и иглы размером N 20: (10х0,90) вводят 0,25 мл суспензии фиксированного вируса бешенства штамм. Прокол делают приблизительно на середине линии, условно соединяющей наружный угол глаза и ухо. При заражении крупных кроликов можно пользоваться шилом из нержавеющей стали или троакаром. Явные признаки паралича появляются у кроликов на 4 день после инокуляции; в редких случаях они развиваются до 7 дня. Извлечение мозга производят у животного только после развития полной картины паралича, характерного для фиксированного вируса бешенства. К числу первых симптомов экспериментального бешенства относятся: повышение температуры тела, пугливость и расширение зрачков. Затем появляются менингеальные явления, парезы, начинающиеся обычно с задних конечностей, быстро прогрессирующие параличи, захватывающие все конечности, шейную и затылочную мускулатуру.

4.4.13. Больных кроликов с картиной полного паралича, но с еще сохранившимся дыханием забивают путем тотального обескровливания. Головной мозг используется для изготовления рабического антигена. После декапитации производят снятие шкурки, отделяют позвоночник вместе со спинным мозгом, которые подвергают автоклавированию (2,0 кГс/см(0,2 МПа). 132±2 °С), как заразный материал.

4.4.14. Для извлечения головного мозга животное укладывают на секционный лоток животом вниз так, чтобы голова оказалась на краю стола. С помощью пинцета, скальпеля и ножниц отделяют голову от туловища. Затем скальпируют кожу головы, удаляя уши и верхние веки. Обнаженную поверхность черепа смачивают 70%-ным спиртом и помещают в кристаллизатор. Кристаллизатор переносят в стерильный бокс для приготовления антигена. Перед вскрытием черепа его двухкратно обрабатывают 70%-ным этиловым спиртом. Затем череп кролика закрепляют в специальное приспособление (прилож.1), обеспечивающее надежную фиксацию головы животного. Удерживая секционный нож в левой руке, правой рукой с помощью молотка вскрывают черепную коробку четырьмя прямоугольными разрезами. Сначала следует сделать разрез по линии соединяющей середины глаз, затем разрез в теменной области, а затем соединить эти два разреза перпендикулярными разрубами. Затем, отложив в сторону секционный нож и молоток, с помощью пинцета и ножниц высвобождают твердую мозговую оболочку и переднюю часть мозга отделяют на уровне обонятельной доли; пересекают продолговатый мозг позади мозжечка, приподнимают мозг, пересекают перекрест зрительных нервов и затем переносят его на стерильную чашку Петри для взвешивания.

4.4.15. Для приготовления антигена головной мозг после взвешивания помещают в стерильную ступку или гомогенизатор и измельчают. К измельченному мозгу добавляют дистиллированную воду, содержащую 0,5% фенола до получения 10%-ной мозговой суспензии. Суспензию мозга фильтруют через тройной слой марли. Стерильность мозговой суспензии проверяют посевом на сахарный бульон, мясопептонный агар и мясопептонный бульон с 0,1% агара и кусочками мяса. Посевы выдерживаются при 37 °С в течении 5 сут. Разрешается для иммунизации лошадей-продуцентов использовать стерильный антиген, сохранившийся при температуре 4 °С не более 14 сут.

4.4.16. Для приготовления исходных культур фиксированного вируса бешенства головной мозг кролика помещают в стерильную ступку или гомогенизатор и измельчают. К измельченному мозгу добавляют дистиллированную воду до получения 10% мозговой суспензии. Стерильность мозговой суспензии проверяют посевом на сахарный бульон, мясопептонный агар и мясопептонный бульон с 0,1% агара и кусочками мяса. Мозговую взвесь разливают стерильно по аликвотам объемом 4-5 мл и замораживают при температуре не выше минус 18 °С. Оптимальной температурой для хранения штаммов фиксированного вируса бешенства является минус 70 °С. Для заражения достают одну аликвоту из морозильника и помещают в холодильник на 4 °С на 18-20 ч. После оттаивания осторожно пастеровской пипеткой отбирают среднюю фазу мозговой суспензии, содержащую максимальное количество вируса.

4.4.18. Правила вскрытия мышей. Мышей забивают в состоянии выраженных терминальных симптомов бешенства хлороформом. Труп мыши фиксируют на дощечке спиной кверху. Для этого необходимо две булавки - одной прикалывают основание хвоста, другой - кончик морды. Можно пользоваться и тремя булавками, чтобы фиксировать передние лапы и хвост. После обработки спиртом кожу головы и шеи отпрепаровывают с помощью ножниц и пинцета, открывая череп. Череп зажимают в глазницах хирургическим пинцетом, изогнутыми ножницами отделяют крышку черепа, обнажая мозг. С помощью тех же изогнутых ножниц извлекают мозг и переносят в стерильную чашку Петри, которую заранее взвешивают. Производят взвешивание чашки Петри с мозговой тканью. Затем мозг переносят в стерильную ступку, где с помощью стерильного пестика приготавливают 10%-ную мозговую взвесь с добавлением дистиллированной воды. Взвесь разливают по аликвотам и хранят при температуре не ниже минус 18 °С, Оптимальной температурой для хранения штаммов фиксированного вируса бешенства является минус 70 °С.

4.4.19. По окончании работы все объекты с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства должны быть убраны в хранилища (холодильники, термостаты, шкафы и т.д.); в обязательном порядке проводится дезинфекция рабочих поверхностей столов 3%-ным раствором хлорамина.

4.4.20. Использованные пипетки полностью (вертикально) погружаются в дезинфицирующий раствор (3%-ный хлорамин), избегая образования в каналах пузырьков воздуха. Длительность дезинфекции 60 мин.

4.4.21. Использованная посуда, твердые отходы из "заразной" зоны лаборатории должны собираться в закрывающиеся емкости и передаваться в автоклавную или дезинфицироваться на месте. Слив необеззараженных жидкостей в канализационную сеть запрещается.

4.4.22. Перенос производственных штаммов фиксированного вируса бешенства и использованной посуды для обеззараживания должен осуществляться в закрытых емкостях, исключающих инфицирование персонала во время транспортирования. После завершения работы помещение "заразной" зоны лаборатории запирается и опечатывается. Опечатывание и снятие печатей производят сотрудники лаборатории, имеющие разрешение руководителя лаборатории (подразделения).

4.4.23. Иммунизацию лошадей-продуцентов осуществляют согласно регламента производства "Иммуноглобулина антирабического жидкого из сыворотки крови лошади".

4.4.24. Правила введения антигена. Введение антигена лошади производится в специально оборудованном помещении (операционной). Сотрудники, осуществляющие инъекцию антигена, одеты в противочумный костюм 3-типа с резиновыми перчатками. Для введения антигена используют прибор для массовых прививок ПМП-1, который соединяется посредством силиконового шланга с иглой и флаконом с антигеном. Вся инъекционная система соединяется герметично. Место введения антигена предварительно обрабатывают 70%-ным раствором спирта. Иглу вводят подкожно и под небольшим давлением медленно вводят антиген. После инъекции вентилем перекрывают подачу антигена, кожу на месте введения иглы зажимают кровоостанавливающим пинцетом на 1 мин. Пинцет снимают, место инъекции обрабатывают тампоном, смоченным 70%-ным раствором спирта, и накладывают тампон с коллодием или фурапластом с перхлорвинилом. После использования вся инъекционная система подвергается кипячению в течение 30 мин в 2%-ном содовом растворе. В процессе гипериммунизации постоянно следят за общим состоянием и температурной реакцией продуцентов. В случае повышения температуры очередную инъекцию антигена производят после ее снижения до нормы.

4.4.25. Хранение производственных штаммов фиксированного вируса бешенства осуществляется в помещениях заразной зоны. Хранение, учет, передача, транспортирование и уничтожение производственных штаммов фиксированного вируса бешенства проводятся в соответствии с требованиями СП 1.2.036-95 .

4.4.26. Прием посетителей разрешается только в специально отведенных местах в "чистой" зоне лаборатории.

4.4.27. Вынос из лаборатории оборудования, лабораторной или хозяйственной посуды, инструментов и др. производится только после их дезинфекции и с разрешения ее руководителя.

4.4.28. В "заразной" зоне лаборатории запрещается:

- оставлять после окончания работы на рабочих местах посуду с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства "Москва" и "CVS";

- пипетировать ртом, переливать жидкий инфекционный материал через край сосуда (пробирки, колбы, флакона);

- хранить верхнюю одежду, головные уборы, обувь, зонты, хозяйственные сумки, косметику и т.п., а также продукты питания;

- курить, пить воду;

- оставлять без надзора рабочее место во время выполнения любого вида работ с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства;

- сливать жидкие отходы (инфицированные жидкости, исследуемый материал и т.д.) в канализацию без предварительного обеззараживания.

4.4.29. Допускается в одном и том же помещении проведение экспериментальных и производственных работ с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства. Экспериментальная и производственная работа должны быть разнесены по времени. Экспериментальный материал должен храниться отдельно от производственного в специально отведенном для него холодильнике или термостате.

4.4.30. Все сотрудники, работающие с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства, должны находиться на диспансерном наблюдении. Периодические медицинские осмотры проводятся в соответствии с действующими приказами (N 280/88 - Минздравмедпром и Госкомсанэпиднадзор России).

4.5. Требования к порядку использования средств индивидуальной защиты (СИЗ)

4.5.1. Сотрудники лаборатории должны быть обеспечены медицинскими халатами, пижамами (комбинезонами), шапочками, сменной обувью и другими средствами индивидуальной защиты в зависимости от характера выполняемых работ и в соответствии с действующими нормами.

4.5.2. Рабочая одежда и обувь должны быть индивидуальными, соответствовать размерам работающих и храниться отдельно от личной одежды.

4.5.3. При проведении исследований в боксированных помещениях производится смена медицинского халата на противочумный или хирургический, доходящий до нижней трети голени. Дополнительно используются резиновые перчатки, тапочки и, при необходимости, респираторы (маски). Операции, требующие вскрытия черепа и позвоночника необходимо проводить в резиновых перчатках, защитных очках и в противочумных халатах. Необходимо также надевать резиновые или прочные полиэтиленовые фартуки, которые легко дезинфицировать или уничтожить.

4.5.4. Смена рабочей одежды должна проводиться по мере загрязнения, но не реже 1 раза в неделю.

4.5.5. Перед сдачей в стирку защитная одежда должна быть обеззаражена замачиванием в растворе 1%-ного хлорамина.

4.6. Требования к обеззараживанию материала и уборке помещений

4.6.1. Дезинфекцию различных объектов при работе с производственными штаммами фиксированного вируса бешенства проводят в соответствии с характером объекта, подлежащему обеззараживанию.

Таблица


	Объект, подлежащий обеззараживанию	Способ обеззараживания	Обеззараживающее средство

Вирус бешенства фиксированный

"...Фиксированный вирус бешенства - аттенуированный штамм вируса бешенства, полученный путем длительного пассирования через головной мозг кролика. Производственные штаммы фиксированного вируса бешенства хранятся в ГИСК им. Л.А. Тарасевича и выдаются один раз в год учреждениям, имеющим право на работу с микроорганизмами III - IV группы патогенности..."

Источник:

"БЕЗОПАСНОСТЬ РАБОТЫ С ПРОИЗВОДСТВЕННЫМИ ШТАММАМИ ФИКСИРОВАННОГО ВИРУСА БЕШЕНСТВА. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ. МУ 3.3.1.1099-02"

(утв. Главным государственным санитарным врачом 15.01.2002)

Официальная терминология . Академик.ру . 2012 .

Смотреть что такое "Вирус бешенства фиксированный" в других словарях:

вирус бешенства фиксированный - вакцинный штамм В. бешенства, характеризующийся строго определенным инкубационным периодом заболевания кроликов при внутримозговом заражении … Большой медицинский словарь

ПАСТЕРОВСКИЕ ПРИВИВКИ - ПАСТЕРОВСКИЕ ПРИВИВКИ, или антира бические прививки, являются профилактич. мероприятием против бешенства (см.). В качестве антигена применяется фиксированный яд (virus fixe) (см. Бешенство), к рый до наст. времени почти повсеместно продолжает… … Большая медицинская энциклопедия

Иммунизация - I Иммунизация (лат. immunis свободный, избавленный от чего либо; синоним: иммунопрофилактика, прививки предохранительные, прививки профилактические) специфическая профилактика заразных болезней людей и животных. Иммунопрофилактика ряда… … Медицинская энциклопедия

БЕШЕНСТВО - мед. Бешенство вирусное инфекционное зоонозное заболевание с контактным механизмом передачи возбудителя, протекающее с развитием тяжёлого прогрессирующего поражения ЦНС с летальным исходом. Отнесено к группе особо опасных инфекций. Этиология … … Справочник по болезням

пассаж - а, м. passage m., > нем. Passasche. устар. 1. первоначально воен. Путь, проход, переправа. СИЗ 385. А все пассажи и перевозы, и переправы все их кошту. 1711. АК 4 29. Письмо ваше мы получили, на которое иного ответствовать не имеем, только… … Исторический словарь галлицизмов русского языка

Оглавление темы "Вирус бешенства. ВИЧ. Вирус иммунодефицита человека.":

Возбудитель бешенства представлен одним антигенным вариантом. Выделяют «фиксированный» (virus fixe) и «уличный» вирусы бешенства .

«Фиксированный» тип вируса бешенства получен Пастёром после многократного пассирования на лабораторных животных; не поражающий периферические нервы.

«Уличный» вирус бешенства вызывает заболевание. Атигены вирусов бешенства «фиксированного» н «уличного» типов идентичны.

Патогенез бешенства

Вирус бешенства размножается в мышечной и соединительной тканях, где персистирует в течение недель или месяцев. Затем вирус бешенства мигрирует по аксонам периферических нервов в базальные ганглии и ЦНС, где размножается в сером веществе, вызывая дегенерацию нейронов.

Затем вирус бешенства диссеминирует по центробежным нейронам в различные ткани (включая слюнные железы).

Клинические проявления бешенства

Длительность инкубационного периода бешенства варьирует от 1-3 мес до года, но она может сокращаться до 6 дней, что зависит от удалённости места проникновения вируса от головного мозга.

Основные симптомы продромального периода бешенства - раздражительность, бессонница и чувствительные нарушения (например, парестезия) в области раны.

Бешенство проявляется нарушением тонуса мышц, приводящим к затруднению глотания (сначала жидкой, а затем и твёрдой пищи), генерализованными судорогами, делирием и комой. В редких случаях наблюдают развитие параличей.

Прогноз бешенства крайне неблагоприятный, летальность достигает 100%.

Видео вирус бешенства

Бешенство является острым инфекционным заболеванием человека и животных, при котором поражается центральная нервная система. Его причиной являются вирусы, обладающие тропностью к тканям нервной системы, куда после укуса больного животного они продвигаются со скоростью 3 мм в час. После репликации и накопления в тканях центральной нервной системы вирусы по нейрогенным путям распространяются в другие органы, чаще всего в слюнные железы.

Частота развития заболевания зависит от места и тяжести поражения при укусе. В 90% случаев болезнь развивается при укусах в шею и лицо, в 63% — в кисти рук, в 23% — в плечо. Признаки и симптомы бешенства на всех стадиях развития заболевания высокоспецифичны. Эффективных методик лечения заболевания не существует. Болезнь, как правило, заканчивается смертельным исходом. Своевременная прививка от бешенства — самая эффективная профилактика заболевания. Антирабическую вакцину впервые в 1885 году получил французский микробиолог Луи Пастер. А в 1892 году Виктор Бабеш и в 1903 году А. Негри описали специфические включения в нейронах головного мозга погибших от бешенства животных (тельца Бабеша — Негри).

Рис. 1. На фото вирусы бешенства.

Вирус бешенства

Фильтрующийся вирус бешенства является представителем рода Lyssavirus (от греческого lyssa, что значит бешенство, бес) семейства Rhabdoviridae .

Вирус бешенства обладает тропностью к нервной ткани.

Вирусы бешенства чувствительны к нагреванию. Они быстро инактивируются при воздействии на них растворов щелочей, йода, детергентов (поверхностно-активных синтетических веществ), дезинфицирующих средств (лизол, хлорамин, карболовая и хлористоводородная кислоты).
Вирусы чувствительны к ультрафиолетовому облучению, быстро погибают при высушивании, в течение 2-х минут погибают при кипячении.
При низких температурах и заморозке вирусы бешенства сохраняются длительное время. До 4-х месяцев сохраняются в трупах животных.

Вирусы передаются человеку при укусах со слюной или через поврежденные кожные покровы, куда попала слюна больного животного. Поражение центральной нервной системы неизбежно приводит к смерти больного. О наличии вирусов в центральной нервной системе говорит обнаружение «телец Бабеша-Негри» в ганглиозных клетках.

Рис. 2. На фото вирусы бешенства, по внешнему виду напоминающие пулю. Один их конец закруглен, второй плоский. Синтез вирусных частиц происходит в цитоплазме нейронов.

Рис. 3. На фото вирус бешенства. Вирион окружен двойной оболочкой. На внешней оболочке вирусных частиц расположены шипы (выступы) с шишковатыми вздутиями на концах. Внутри вирионов расположен внутренний компонент, представляющий собой нитевидные образования. На фото отчетливо видны поперечные полосы, представляющие собой нуклеопротеид.

Тельца Бабеша-Негри

В 1892 году В. Бабешом и в 1903 году А. Негри были описаны специфические включения в цитоплазме нейронов головного мозга животных, которые погибли от бешенства. Они получили название телец Бабеша — Негри. Крупные нейроны аммонова рога, пирамидальные клетки больших полушарий, клетки Пуркинье мозжечка, нейроны зрительного бугра, клетки продолговатого мозга и ганглии спинного мозга — участки нервной системы, где чаще всего встречаются тельца Бабеша-Негри.

Цитоплазматические включения являются строго специфичными для заболевания бешенством

Тельца Бабеша-Негри определяются в нейронах головного мозга собак, погибших от бешенства, в 90 — 95% случаев, у человека — в 70% случаев.

По мнению ряда исследователей тельца Бабеша-Негри представляют собой:

места, где происходит репликация вирионов,
места, где происходит продукция и накопление специфического антигена возбудителя бешенства,
внутренняя зернистость телец Бабеша-Негри представляет собой вирусные частицы, соединенные с клеточными элементами.

Рис. 4. На фото нервные клетки с цитоплазматическими включениями. Тельца Бабеша-Негри имеют разную форму — округлую, овальную, сферическую, амебовидную и веретенообразную.